12/11/2008

Coloração de Gram

Preparo do esfregaço

Suspender uma pequena porção da amostra bacteriana a ser corada em uma gota de água ou solução salina 0,85%, sobre uma lâmina de microscópio, espalhando a gota. Este procedimento deve ser feito com um alça bacteriológica flambada ou um palito de madeira esterilizado. Deixar o material secar e, em seguida, fixá-lo com calor, flambando rapidamente a lâmina acima da chama de um bico de Bunsen.

Aplicação do corante primário

Cobrir toda a sua superfície da lâmina com o corante cristal violeta; deixar em repouso por um minuto. Descartar o excesso de corante ou enxaguar a lâmina com água.

Aplicação do fixador

Cobrir toda a sua superfície da lâmina com lugol; deixar em repouso por um minuto. Descartar o excesso do fixador ou enxaguar a lâmina com água.

Descoloração

Com a lâmina inclinada, despejar algumas gotas de álcool-acetona 1:1 v:v (descolorizador) para remover o complexo cristal violeta-lugol de células Gram-negativas. Este procedimento não pode exceder a cinco segundos, pois o descolorizador poderá remover o corante cristal violeta das células Gram-positivas. Em seguida, enxaguar a lâmina com água para remover excesso de solvente.

Aplicação do corante secundário

Cobrir toda a sua superfície da lâmina com o corante fucsina básica; deixar em repouso por um minuto. Enxaguar a lâmina com água e tocar as bordas com papel absorvente para remoção do excesso de água.

Microscopia

Examinar a amostra ao microscópio óptico. Na aplicação da técnica de coloração de Gram de organismos desconhecidos, pode-se utilizar como controles uma bactéria Gram-positiva e uma Gram-negativa, conhecidas, preparando-se lâminas com três esfregaços, sendo o esfregaço central o da bactéria desconhecida. Desta forma, as bactérias controles indicarão se a técnica foi ou não bem sucedida. Sugere-se utilização de Bacillus subtilis e Escherichia coli como controles Gram positivo e Gram negativo, respectivamente.


fonte:http://www.fam.br/microrganismos/metodo_coloracao_de_gram.htm

12 comentários:

  1. Anônimo5/19/2009

    Gostei muito da explicação. Só deveria salientar mais a questão da visualização ao microscópio.

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  2. Anônimo9/16/2009

    voce poderia dar ex de bacteria gram positivas e gram negativas..
    mais a explicação é otima^^

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  3. Anônimo11/02/2009

    Boa explicação .Mas acho que você poderia falar mais sobre os componentes das membrana gram positiva e negativa que possibilitam a coloração.

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  4. Anônimo5/18/2010

    Deixou a desejar

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  5. Anônimo9/02/2010

    podiam colocar mais sob esterizaçao do materialdurante do esfregaço e depois.

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  6. Anônimo9/30/2010

    Foi otima a explicação mais eu queria mais imagens do trabalho.!

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  7. Anônimo2/07/2011

    JNETO
    Não se preoculpe professor ninguem vai satisfazer inguem por um todo( completo)

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  8. Anônimo4/07/2011

    A excelente explicação me ajudou muito a fazer o meu relatório,mas, se tivesse imagens em seqüência
    do procedimento de coloração seria melhor ainda.
    Muito obrigada.

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  9. Izabel5/10/2011

    gostei muito da explicação .Vc foi muito objetiva
    legal a parte das bactérias de controle . Gostei da sua didática.Ah , se todos professores fossem assim ...obrigada

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  10. Anônimo6/20/2012

    adorei vc é 10

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  11. Anônimo6/20/2012

    a minha buceta da doendo

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  12. Anônimo9/04/2012

    Curto e objetivo

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