12/11/2008

Coloração de Endósporos

Preparo do esfregaço

Suspender uma pequena porção da amostra bacteriana a ser corada em uma gota de água ou solução salina 0,85%, sobre uma lâmina de microscópio, espalhando a gota. Este procedimento deve ser feito com um alça bacteriológica flambada ou um palito de madeira esterilizado. Deixar o material secar e, em seguida, fixá-lo com calor, flambando rapidamente a lâmina acima da chama de um bico de Bunsen.


Aplicação do corante primário

Cobrir toda a sua superfície da lâmina com o corante verde de malaquita e manter a lâmina sobre a chama do bico de Bunsen até o corante emitir vapores. Deixar esfriar por cinco minutos. Enxaguar a lâmina com água.


Aplicação do corante secundário

Cobrir toda a sua superfície da lâmina com o corante safranina ou fucsina; deixar em repouso por trinta segundos. Enxaguar a lâmina com água e tocar as bordas com papel absorvente para remoção do excesso de água.

Resultados

Examinar a amostra ao microscópio óptico. As células vegetativas apresentarão coloração avermelhada e os esporos serão corados em verde. As figuras 1 e 2 são micrografias ópticas de Bacillus subtillis e Bacillus cereus, respectivamente, onde as células vegetativas aparecem coradas em vermelho e os endósporos aparecem corados em verde.




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